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尊龙凯时猪瘟病毒抗体检测试剂盒使用手册

发布时间:2025-03-08   信息来源:董香瑾

尊龙凯时推出的猪瘟病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)为您提供高效、可靠的检测方案,助力猪疫病防控。

尊龙凯时猪瘟病毒抗体检测试剂盒使用手册

产品名称

通用名:猪瘟病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

包装规格

本产品分为96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒的多种规格,满足不同检测需求。

预期用途

猪瘟是由经典猪瘟病毒(CSFV)引起的高度传染性疾病。该病以高热、出血及坏死等症状著称,给养猪业带来重大损失。本试剂盒旨在检测猪血清中的猪瘟病毒抗体,可用于评估猪瘟疫苗的免疫效果。

原理

该试剂盒包括预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂。采用酶联免疫法(ELISA)原理,检测猪血清或血浆样本中的抗体。实验中,如果样品含有猪瘟病毒抗体,将与酶标板上的抗原结合,经过清洗后加入酶标记物,形成特异性复合物;再通过加入TMB底物液,生成蓝色产物,颜色深浅与样品中抗体含量成正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定样品吸光值,以判断猪血清中是否存在猪瘟病毒抗体。

试剂盒组成及保存

本试剂盒需在2~8℃保存,有效期为12个月。开封后的板条需避光保存,避免潮湿,使用期限为2个月。

适用仪器

需配备具有450nm和630nm波长功能的酶标仪、37℃恒温设备和可调微量移液器进行检测。

样品准备

  1. 提取全血,制备清亮、无溶血的血清,样品可在2~8℃保存一周,长期保存需-20℃。
  2. 将待检血清用稀释液稀释至40倍(例如5μl血清加入195μl稀释液),阴阳性对照无需稀释。
  3. 使用的浓缩洗涤液需先恢复至室温并用蒸馏水或去离子水稀释为工作洗涤液(如19份水+1份浓缩洗涤液)。

检验方法

  1. 使用前将试剂盒置于室温30分钟。
  2. 取适量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条密封保存于2~8℃。
  3. 各对照孔分别加入100μl阴性/阳性对照,样品孔中加入100μl稀释后的样品。
  4. 混匀后盖好膜,置于37℃避光反应30分钟。
  5. 弃去孔内液体,每孔加入350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
  6. 每孔加入100μl酶标记物,再次进行37℃避光反应30分钟。
  7. 清洗同前。
  8. 每孔依次加入底物液A、B各50μl,混匀,在37℃避光反应10分钟。
  9. 加入终止液50μl,混匀,在450nm(可用630nm参比)的波长下测定吸光值。

参考值及结果判定

正常情况下,阴性对照的平均OD值应≤0.3,阳性对照应≥0.6。
样品的OD值为ODS,SP值计算公式为:SP值 = (ODS - ODNC) / (ODPC - ODNC);SP值≥0.2为阳性,SP值<0.2为阴性。若结果为阴性,建议对猪只补打相应疫苗。

注意事项

  1. 实验时佩戴手套及工作衣,确保消毒隔离制度有效执行,废弃物需按传染物处理。
  2. 终止液具有腐蚀性,避免皮肤接触,如不慎接触请立即用大量水冲洗。
  3. 酶标板需在室温下恢复后方可开启,未用完的需用干燥剂密封保存。
  4. 浓缩洗涤液在低温下可能结晶,使用前需完全溶解。
  5. 洗涤时应确保各孔内液体充足,避免游离酶未被完全洗净。
  6. 样品应保持新鲜,实验结果需以酶标仪读数为准。
  7. 不同批号的试剂不能混用。

尊龙凯时致力于为客户提供优质的生物医疗产品,确保养猪业的健康和可持续发展。选择尊龙凯时,让您的检测更加精准,更有保障。