ELISA，即酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的重要免疫酶技术。在成功开发ELISA方法的过程中，选择和搭配所用试剂耗材至关重要。对这些试剂的特性和多样性有深入了解，有助于在不同实验需求中找到高质量ELISA方法的合适组合。

一、酶标板材

市场上常见的酶标板材通常由聚苯乙烯（C8H8）制成，较为完善的产品线会根据不同化学修饰的特点提供多种选择。酶标板材通常按照高结合力和中结合力分类，但基于笔者多年的经验，更推荐根据亲水性、弱亲水性、未处理和疏水性四个等级进行分类。一般情况下，从亲水到疏水，板材对蛋白的结合能力由强到弱，这会导致相同浓度的蛋白在亲水性板材上固定量更高（最大吸附抗体量达到220ng），而疏水性板材的吸附能力则减少到100ng。此外，疏水性板材在吸附效率提高的同时，也可能导致样品中其他蛋白和酶联抗体的非特异性吸附，因此在选择板材时应谨慎。

二、包被液

常用的包被液包括PBS（pH 7.4）和碳酸钠-碳酸氢钠溶液（pH 9.6），其中pH和离子浓度会对包被效率产生影响。包被蛋白并非都能完全吸附在酶标板材上，有研究表明通过抽真空处理可提高蛋白的吸附密度。

三、封闭剂

常用的封闭剂包括3% BSA（w/v）和5%脱脂奶粉（w/v）。封闭剂的主要作用是覆盖酶标板材未被包被蛋白占据的部分，以抵御后续样品和酶联抗体的非特异性吸附。根据笔者的经验，封闭剂在处理简单成分的样品溶液时效果更佳，面对复杂样品时封闭效果则不尽理想。此外，使用生物素-链霉亲和素体系时，绝对不要选用脱脂奶粉作为封闭剂，以免生物素干扰检测结果。

四、洗涤液与稀释液

常用的洗涤液是中性缓冲液与适量去污剂（如PBST：0.05% Tween-20 in PBS）的混合物。稀释液通常在洗涤液中添加一定浓度的封闭剂，如0.5% BSA（w/v）以控制非特异背景。在检测体内样品时常加入阴性血清，以确保不同稀释度的样品具有相同的非特异背景。

五、酶联抗体

酶联抗体的种类繁多，按照作用位点可以分为特异性酶联抗体和通用型酶联抗体。特异性酶联抗体针对特定蛋白的表位，而通用型则通常针对多肽序列、标签生物素等。常用的酶标记如碱性磷酸酶（AP）和辣根过氧化氢酶（HRP）。根据抗体分子的大小，酶联抗体可分为全长、Fab片段和scFv酶联抗体。分子量越小的抗体，与样品蛋白结合可能受到的空间阻碍风险越小，但也增加了非特异结合的可能性。

六、显色液与酶标仪

显色液的选择需与酶联抗体标记的酶相匹配，同时要与实验室的酶标仪相适应。以HRP为例，可使用TMB显色液并配合吸光度读数的酶标仪进行检测，或使用Ampliflu™ Red进行荧光读数，亦可采用QuantaRed ADHP进行化学发光读数。通常，化学发光的灵敏度优于荧光，荧光又优于吸光度。即便是常用的TMB显色液，不同的显色强度提供的产品，在方法开发中需要按照具体情况进行选择。

在生物医疗领域，选用合适的材料与试剂是确保ELISA实验成功的关键，而尊龙凯时作为行业品牌，将提供高品质的试剂和耗材，以支持研究人员的需求。